生長因子又被稱之為生長肽,是一類通過與特異的、高親和的細胞膜受體結合,調節細胞生長與其他細胞功能等多效應的多肽類物質。生長因子子廣泛存在予機體內各種組織,包括成熟組織和胚胎組織,并通過自分泌和或旁分泌方式進行調節,對機體的免疫、造血調控、創傷愈合、血管形成、細胞分化、細胞凋亡、形態發生、胚胎形成等方面產生著重要的調控作用。
在生長因子ELISA試劑盒的檢測過程中,首先需要將標準品、待測樣本和生物素化的檢測抗體加入到酶標板孔中。這些物質會經過一段時間的孵育,使得樣本中存在的VEGF與固相抗體和檢測抗體發生結合反應。
在孵育過程結束后,需要通過洗滌的方式去除未結合的物質。這一步驟是為了確保后續的反應只發生在已經結合的VEGF上,從而提高檢測的準確性。
接下來,將辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素加入到酶標板孔中。這種酶具有高度的親和力,能夠與生物素化的檢測抗體結合。再次進行洗滌后,加入顯色底物TMB。
TMB是一種無色的化合物,但在辣根過氧化物酶的催化下,它會轉化為一種有色的產物。因此,當TMB加入到酶標板孔中后,需要在避光的條件下進行顯色反應。這樣可以避免光照對顯色反應的影響,從而保證顏色反應的準確性。
最后,顏色反應的深淺與樣本中VEGF的濃度成正比。也就是說,如果樣本中的VEGF濃度較高,那么顏色反應就會更深;反之,如果VEGF濃度較低,顏色反應就會較淺。通過對比標準品的顏色反應,就可以準確地測定出樣本中VEGF的濃度。
1.試劑盒應保存在2-8攝氏度的溫度范圍內。在使用前,需要將試劑盒從冰箱中取出,并在室溫下平衡60分鐘。如果濃縮洗滌液出現結晶現象,這是正常的,可以通過水浴加熱使結晶溶解后再使用。同樣地,樣本也需要在室溫下平衡60分鐘才能使用。
2.預處理后的樣本無需稀釋,可以直接取10μL加樣即可進行實驗。
3.在進行溫育操作時,必須嚴格按照說明書中標明的時間、加液量和順序進行操作。這樣可以確保實驗結果的準確性和可靠性。
4.實驗中未使用的板條應立即放回自封袋中,并密封保存在低溫干燥的環境中。這樣可以防止板條受到污染或損壞。
5.所有液體組分在使用前應充分搖勻。這樣可以確保液體組分均勻分布,避免影響實驗結果的準確性。