土壤有效硅試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意 :正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
硅元素是一種十分重要的植物營養元素,土壤中有效硅含量影響著植物的光合作用、呼吸作用以及對逆境的抗性。
測定原理:
硅酸根與鉬酸銨在弱酸條件下生成硅鉬酸,可被還原劑還原成硅鉬藍,在700nm有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器:
天平、常溫離心機、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、震蕩儀。
試劑組成和配制:
提取液:液體105mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體4mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體4mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體4mL×1瓶,4℃保存。
試劑四:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加入4mL試劑四溶劑充分溶解。
試劑四溶劑:液體4mL×1瓶,4℃保存。
樣本處理:
新鮮土樣風干,過20目篩,按照土壤質量(g):提取液體積(mL)為1:5的比例(建議稱取約0.2g土樣,加入1mL提取液),振蕩提取1h,10000g ,25℃離心10min,取上清液待測。
測定操作表:
空白管 | 測定管 | |
樣本(μL) | 40 | |
提取液(μL) | 40 | |
試劑一(μL) | 40 | 40 |
混勻,35℃,15min | ||
試劑二(μL) | 40 | 40 |
混勻,25℃,10min | ||
試劑三(μL) | 40 | 40 |
試劑四(μL) | 40 | 40 |
充分混勻,25℃靜置30min | ||
于微量石英比色皿/96孔板,蒸餾水調零,測定700nm處吸光值A,分別記為A空白管和A測定管,△A=A測定管-A空白管 |
計算公式:
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線:y = 0.0933x -0.0523,R2 = 0.9992
有效硅含量(mg/kg)=(△A+0.0523)÷ 0.0933×V反總÷(W×V樣÷V樣總)
= 53.6×(△A+0.0523)÷W
V反總:反應總體積,0.2mL;V樣:反應體系中加入樣本體積,0.04mL;V樣總:加入提取液體積,1mL,W:樣本質量,g
b. 用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線:y = 0.0467x -0.0523,R2 = 0.9992
有效硅含量(mg/kg)=(△A+0.0523)÷ 0.0467×V反總÷(W×V樣÷V樣總)
= 107.2×(△A+0.0523)÷W
V反總:反應總體積,0.2mL;V樣:反應體系中加入樣本體積,0.04mL;V樣總:加入提取液體積,1mL,W:樣本質量,g
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