土壤有效硼試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意 :正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
土壤中有效硼直接影響著植物的吸收和利用。
測定原理:
硼與甲亞胺在弱酸條件下形成棕黃色配合物,在420nm有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器:
天平、常溫離心機、震蕩儀、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板。
試劑組成和配制:
試劑一:液體5mL×1支,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加8mL蒸餾水溶解,加0.125mL乙酸。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加4mL蒸餾水溶解。
樣本處理:
新鮮土樣風干,過100目篩,按照土壤質量(g):蒸餾水體積(mL)為1:2的比例(建議稱取約0.5g土樣,加入1mL蒸餾水)加入蒸餾水,沸水中浸提10min,待自然冷卻,加入50μL試劑一,震蕩5min,8000g ,25℃離心10min,取上清液待測。
測定操作表:
空白管 | 測定管 | |
樣本(μL) | 40 | |
試劑二(μL) | 80 | 80 |
試劑三(μL) | 40 | 40 |
H2O(μL) | 80 | 40 |
充分混勻,25℃黑暗中靜置1h | ||
于微量石英比色皿/96孔板,蒸餾水調零,測定420nm處吸光值A,分別記為A空白管和A測定管,△A=A測定管-A空白管 |
計算公式:
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線:y = 0.3897x - 0.021,R2 = 0.9995
全硼含量(mg/kg)=(△A+0.021)÷ 0.3897÷(W÷V樣總)
= 2.56×(△A+0.021)÷W
V樣總:加入提取液體積,1mL,W:樣本質量,g
b. 用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線:y = 0.1949x - 0.021,R2 = 0.9995
有效硼含量(mg/kg)=(△A+0.021)÷ 0.1949÷(W÷V樣總)
=5.13×(△A+0.021)÷W
V樣總:加入提取液體積,1mL,W:樣本質量,g
注意事項:
1. 配制好的試劑二4℃保存不可超過7天。
2. 顯色時嚴格控制溫度并且避光,以免顯色劑見光分解。
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