兔膀胱成纖維細胞
產品名稱 ：兔膀胱成纖維細胞
產品貨號 ：YLK-XB0991h
組織來源 ：膀胱組織
產品規格 ：5×105cells/T25細胞培養瓶
細胞簡介：
膀胱成纖維細胞分離自膀胱組織。膀胱是一個儲尿器官，在哺乳類動物，它是由平滑肌組成的一個囊形結構，位于骨盆內，其后端開口與尿道相通。膀胱與尿道的交界處有括約肌，可以控制尿液的排出。膀胱壁由三層組織組成，由內向外為黏膜層、肌層和外膜。
肌層由平滑肌纖維構成，稱為逼尿肌，逼尿肌收縮，可使膀胱內壓升高，壓迫尿液由尿道排出。在膀胱與尿道交界處有較厚的環形肌，形成尿道內括約肌。在括約肌收縮能關閉尿道內口，防止尿液自膀胱漏出。膀胱壁分為三層：即漿膜層(蜂窩脂肪組織) 、肌肉層(逼尿肌、膀胱三角區肌) 和黏膜層(極薄的一層移行上皮組織) 。
成纖維細胞(Fibroblast) 是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化。成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。
剛分離的膀胱成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起。6h后細胞基本貼壁好后，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團。細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。
細胞融合，并彼此連接成網狀。細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。膀胱成纖維細胞分泌的生長因子是一種具有多功能的促有絲分裂原，研究已表明其參與惡性腫瘤的形成過程。近年來，堿性成纖維細胞生長因子在膀胱癌發病過程中的作用、與生物學行為之間的關系以及治療上的應用已受到重視。
質量檢測
優利科生物實驗室分離的該細胞經Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息
培 養 基 ：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細胞形態 ：成纖維細胞樣
傳代特性 ：可傳5代左右。3代以內狀態佳
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白/酶
培養條件 ：氣相 ：空氣，95% 。C O2，5%
該細胞體外培養周期有限。建議使用優利科生物配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的最佳培養狀態。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余胰蛋白/酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的完培至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養。
4) 待細胞貼壁后，培養觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內加入5ml完培終止消化。
3) 經1000rpm離心5min丟棄上清，用5ml完培基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內。
4) 待細胞貼壁后，培養觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱)。
5) 原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中，胰/酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和公司技術部溝通。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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