NCI-H146 人小細胞肺癌細胞（STR鑒定）

簡介：細胞表達相對大量的c-myc mRNA，但c-myc DNA序列不擴增。表達c-myb, v-fms, Ha-ras, Ki-ras, N-ras, c-raf 1 mRNAs。該細胞高表達四種生化標記物：神經元特異性烯醇酶(neuron specific enolase)、肌酸激酶的腦同工酶(brain isoenzyme of creatine kinase)、L-DOPA脫羧酶(L-DOPA decarboxylase)和類蛙皮素免疫活性(bombesin-like immunoreactivity)。

細胞特性：

1） 來源：男性，59歲 肺; 來源于轉移灶：骨髓

2） 形態：懸浮，多個細胞聚團

3） 含量：>1x106 細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

運輸和保存：

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的注意事項：

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完培6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完培來培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。

培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640基礎培養基                        87%

優質胎牛血清                                                       10%

GlutaMAX-1谷氨/酰胺                                          1%

Sodium Pyruvate丙酮酸鈉                               1%

P/S青霉/素-鏈霉/素                                          1%

注意：該細胞傳代時可以通過加入新鮮培養基稀釋或者通過離心收集并將細胞重懸浮在新鮮培養基中。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完培的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完培重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完培的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

NCI-H146 人小細胞肺癌細胞（STR鑒定）

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